一、玻璃化冷冻胚胎，有哪些步骤？

1、把冷冻培养基放入相应的培养皿中，以备冷冻操作；

2、将胚胎放入平衡液（ES）冷冻培养基中，在显微镜下观察到胚胎皱缩再次膨胀后，立即用巴斯德吸管转移到玻化液（VS）冷冻液中；

3、迅速把胚胎取出放在载杆上，用巴斯德吸管尽量吸出胚胎四周的残留液体。一支载杆上最多可以存放3个胚胎。

二、玻璃化冷冻胚胎有哪些技术要点？

1、建议使用NUNC四孔板，因考虑到胚胎整个的受力面积及沉降速率，使用四孔板可以节省成本，更加快捷利于操作；

2、所有的冷冻培养基在使用前必须上下倒置轻轻晃动两下，使之均匀分布，预热至室温；

3、把胚胎放在ES表面，让胚胎自然下沉，然后出现皱缩后再恢复，当胚胎膨大到最大程度的时候，迅速用巴氏吸管取出胚胎；

4、在ES培养基中的操作时间要控制在5～15分钟内，绝对不能超过15分钟。